皖仪科技离子色谱法测定透明质酸中的季铵盐
引言
透明质酸(Hyaluronic acid，HA)，又称玻尿酸，是一种酸性粘多糖。透明质酸以其独特的分子结构和理化性质在机体内显示出多种重要的生理功能，如润滑关节，调节血管壁的通透性，调节蛋白质，水电解质扩散及运转，促进创伤愈合等。具有较高临床价值的生化药物，广泛应用于各类眼科手术，如晶体植入、角膜移植和抗青光眼手术等。还可用于治疗关节炎和加速伤口愈合。将其用于化妆品中，能起到独特的保护皮肤作用，可保持皮肤滋润光滑、细腻柔嫩、富有弹性，具有防皱、抗皱、美容保健和恢复皮肤生理功能的作用。
透明质酸是人体皮肤组成成分之一，并且具有良好的保湿作用，目前被广泛用于第四代化妆品中，被誉为理想的天然保湿因子，国际上添加HA的化妆品种类已从最初的膏霜、乳液、化妆水、精华素胶囊、膜贴扩展到溶液、粉饼、口红、洗发护发剂、摩丝等，应用日趋广泛。但天然透明质酸存在稳定性较差，易发生降解和亲水性过强等缺点，限制了其应用，因此通过对透明质酸进行修饰改性，从而实现新的生物活性和功能，最常见的一种改性透明质酸就是透明质酸的季铵盐。季铵盐作为常规的阳离子，可以采用离子色谱进行测试。
1 实验方法
1.1测试条件
仪器：IC6200系列离子色谱仪配置阳离子抑制器
色谱柱：阳离子分析柱柱温：30℃；
流速：1ml/min；
进样量：25μL；
检测器：电导检测器
1.2 实验试剂
淋洗液：10mM 甲烷磺酸溶液等度淋洗；
氯化钠溶液：称取7g氯化钠，用水溶解并定容至100mL,配制成0.07g/mL的氯化钠溶液。
氢氧化钠溶液：称取氢氧化钠4g，用水溶解并定容至100mL,配制成1mol/L的氢氧化钠溶液。
标样：2,3-二羟基丙基-三甲基氯化铵标准物质（纯度97%）；
钠离子标准溶液：ρ（K+）=1000mg/L
铵根离子标准溶液：ρ（NH4+）=1000mg/L
样品：客户提供
标准储备溶液：称取0.0871g季铵盐（2,3-二羟基丙基-三甲基氯化铵），用去离子水溶解并定容至50mL，浓度为1690mg/L。
1.3 标准曲线的制备
分别精密移取0.1ml、0.2ml、0.4 ml、0.6ml、0.8ml、1.0ml标准储备溶液，置于6个10mL容量瓶中，加超纯水定容至标线，混匀，即得。标准曲线浓度梯度表见表1；
表1 标准曲线浓度梯度表
1.4 样品溶液配制
称取待测样品0.2139g于25mL容量瓶中，加入2mL氢氧化钠溶液，5mL水，充分混匀后置于上45℃恒温水解2h，水解完成后加入2mL氯化钠溶液和10mL乙腈，混匀，放置室温，随后精确定容至刻度，充分混合均匀，待透明质酸沉降后取上清液1mL，加入1mL氯化钠溶液、5mL乙腈，用水定容至10mL，即得待测样品溶液。
2 测试结果
2.1 干扰实验测试
在前处理中可能引入的钠离子和铵根离子，需要进行干扰实验。按照“1.1“项测试条件进行测试，得到干扰性测试图谱，2,3-二羟基丙基-三甲基氯化铵在测试色谱条件下出峰良好，且与前处理中可能引入的钠离子和铵根离子保留时间差距明显，不会形成干扰。干扰性实验测试图谱见图1。
图1 阴离子测试图谱
2.2 标曲测试
标准曲线系列浓度见表1，按照1.1的测试条件进行测试，得到标准曲线谱图多点重叠谱图如图2，待测离子在该色谱条件下标准曲线线性均大于0.9999，线性良好，线性方程如下表2。
图2 标准曲线谱图多点重叠色谱图
表2 阴离子线性方程
2.3 样品测试
按照“1.1”项色谱条件，连续注入数针样品溶液进样分析，测得样品图谱见图3。连续3针测试数据见表3
图3 样品连续3针测试重叠图谱
表3 样品连续3针测试数据
3 结论
本次实验实现了在淋洗液体系中不加入乙腈相条件下的有效色谱分离与定性，避免了有机相对离子色谱系统的损伤；实验结果表明，在本次实验中，仪器基线平稳、背景值低、季铵盐色谱峰无杂峰干扰、无明显拖尾、保留时间稳定、满足定量需要。
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